آنتی ژن‌های تست HI برای تشخیص وجود و میزان پادتن بر ضد ویروس‌ نیوکاسل

ترکیب آنتی‌ژن:

آنتی‌ژن نیوکاسل، حاوی ویروس لنتوژنیک نیوکاسل می‌باشد. ویروس آنتی‌ژن داخل پرده آلانتوئیک جنین تخم مرغ کشت و تکثیر شده است. به منظور خنثی کردن (کشتن) ویروس به مایع آلانتوئیک حاوی ویروس فرم آلدئید به میزان 1 درصد اضافه شده است. برای نگهداری و ممانعت از کشت و تکثیر باکتری‌ها به میزان 1:20000 تیومرسال (Thiomersal) افزوده شده است. تیتر HA این محصول قبل از ارسال به بازار بیش از 1:512 است. اما از آنجائیکه تیتر در طول زمان افت می‌نماید بهتر است هر هفته قبل از شروع آزمایش آنتی‌ژن را تست کنید تا از عیار آن با خبر شوید و تعداد واحدهای هماگلوتینین دقیقی در دست داشته باشید.

موارد استفاده:

این محصول برای آگاهی از وجود و میزان پادتن ضد ویروس نیوکاسل است که با توجه به شدت جلوگیری (Inhibition) از هماگلوتیناسیون تعیین و ثبت می‌گردد.

روش آزمایش:

• مقدار 0/025 میلی‌لیتر از PBS با محلول سرم فیزیولوژی نمکی را در گوده‌های یک میکروپلیت پلاستیکی بریزید.
• مقدار 0/025 میلی‌لیتر از سرمی که قرار است آزمایش شود را به گوده اول رج اول بیافزاید.
• سرم را به نسبت 2/1 تا خانه آخر همان رج رقیق نمائید.
• مقدار 0/025 میلی‌لیتر آنتی‌ژن (از سوسپانسیون ویروسی که حاوی 8 واحد AI و یا 4 واحد ND هماگلوتینین) است به هر کدام از گوده‌ها بیفزائید. با زدن ضربات آهسته دست مخلوط را تکان دهید تا با هم درآمیزند. پلیت را به مدت 30 دقیقه در حرارت اتاق (20 تا 25 درجه) یا 60 دقیقه در یخچال 4 درجه (در صورتی‌که دمای اتاق بیش از 25درجه باشد) قرار دهید تا درصورت وجود پادتن با آنتی‌ژن ترکیب (پیوند) شود.
• پس از پایان مدت ذکر شده در بالا به هر کدام از گوده‌ها مقدار 0/025 میلی‌لیتر خون جوجه که به میزان 1% (به نسبت حجمی) رقیق شده است، اضافه نمائید و باز هم با زدن آهسته ضربات دست مخلوط را تکان دهید تا تمام اجزاء آن با هم مخلوط شوند.
• پلیت را مدت 30 دقیقه در دمای اتاق و یا اگر هوای اتاق بیش از 25 درجه است در دمای یخچال قرار دهید.
• تیتر سرم، شماره آخرین خانه‌ای است که سرم توانسته باشد 4 واحد ویروسی ND و یا 8 واحد ویروسی AI را خنثی کرده و مانع بروز واکنش هماگلوتیناسیون شده باشد. در موقع خواندن پلیت را کج کنید تا اگر از هماگلوتیناسیون جلوگیری شده باشد گلبول‌های قرمز مثل قطره اشک در جهت پائین سرازیر می‌شوند. باید که سرعت و شیوه سرازیر شدن گلبول‌های قرمز یکسان با خانه‌های شاهد باشد.

آزمایش در صورتی صحیح است که در کل مجموعه سرم مثبت و سرم منفی شناخته شده، با تیتر مشخص و همچنین شاهد بدون سرم وجود داشته باشد.

شیوه نگهداری:

آنتی‌ژن را در یخچال 2 تا 8 درجه نگهداری نمائید.

شکل آنتی‌ژن:

در شیشه‌های 5 میلی‌لیتری و به شکل لیوفیلیزه عرضه می‌گردد.